目的分析存在沙眼衣原体（ＣＴ）、解脲脲原体（ＵＵ）和细菌感染的男性不育症患者的精液参数，探讨相关病原体感染与男性不育的关系，为临床诊治提供一定依据。
方法收集２０１３年７月至２０１５年６月于我院生殖健康科门诊就诊，存在相关病原体感染的男性不育症患者４５６例为病例组，包括ＣＴ感染者１４６例，ＵＵ感染者１６５例，细菌感染者９４例，混合感染者５１例；选择同期来我院体检、有正常生育史的男性１７６例为对照组。全部研究对象均通过手淫法采集精液，行精液常规检测和ＣＴ核酸检测、ＵＵ及细菌培养。
结果合并ＣＴ、ＵＵ或细菌感染的男性不育症患者，其精液体积、精子浓度与正常生育男性精液比较，无显著性差异（Ｐ均＞０．０５）；前向运动精子百分率、非前向运动精子百分率、精子总活力、正常形态精子百分率则显著低于正常生育男性（Ｐ均＜０．０５）。结论ＣＴ、ＵＵ或细菌感染，会导致精子活力下降、畸形率上升，继而引起男性不育。
男性不育；沙眼衣原体；解脲脲原体；细菌感染；精液参数
近年来男性不育症的发病率呈增长趋势，其中一个主要原因就是男性精液质量下降［１］，精液质量下降主要体现在精子活动力降低、精子畸形率增加等。精液实验室检查是目前男性不育症患者最基本的检查手段［２］。多数学者认为精液质量的下降与全球性环境状况恶化、生活方式改变、男性生殖系统疾病等因素密切相关［３］。沙眼衣原体（ＣＴ）、解脲脲原
体（ＵＵ）和细菌感染是常见的男性泌尿生殖系统感染病原体。从精液中检测相关的感染性病原体，已普遍用于临床诊断。我院对男性不育症患者常规进行精液常规参数分析和相关病原体检测。本研究回顾性分析我院生殖健康科２０１３年７月至２０１５年６月就诊的男性不育症患者的临床资料，选取存在ＣＴ、ＵＵ、细菌感染和混合感染的患者，分析其精液实验室检测结果，并与无上述病原体感染、有正常生育史的男性精液进行比较，分析泌尿生殖系统常见病原体感染对精液参数的影响，为男性不育症的临床诊断和治疗提供参考依据。
一、资料与方法
１．研究对象：收集２０１３年７月至２０１５年６月于我院生殖健康科门诊就诊的男性不育症患者精液标本８５２份，纳入病例组４５６份，患者年龄２０～４６岁，平均３３岁，不育年限１～５年，平均２．５年。纳入标准：（１）男性不育症患者，即夫妻婚后同居１
年以上，未采取任何避孕措施，女方未孕者；（２）女方生殖系统常规检查正常，仅由男方原因导致女方不孕；（３）生殖系统病原体检测提示存在ＣＴ、ＵＵ或细菌感染者。排除标准：近期外伤史、性功能障碍、遗传性疾病家族史、睾丸及生精功能异常者。选择同期来我院体检、有正常生育史的男性为志愿者，征求对方意见并签署知情同意书后留取精液标本，行常规参数分析和常见病原体检测，病原体检测阴性的标本纳入对照组，最终纳入１７６份精液标本。该组男性年龄２２～４２岁，平均３６岁。
２．精液标本采集：所有研究对象均禁欲２～７ｄ，禁欲期间忌烟、酒和刺激性饮料，保持良好睡眠。取精前排尿，消毒双手及外生殖器后，采用手淫法收集全部精液于专用取精杯中。标本采集后，立即置于３７℃水浴温箱，待精液液化后及时进行精子浓度、活动率、活动力、畸形率以及其它项目检测，同时留取标本进行ＣＴ－ＤＮＡ检测、ＵＵ及细菌培养。
３．实验室检测：（１）精液常规参数分析：按照世界卫生组织（ＷＨＯ）推荐的精液参数检测方法［４］，进行精液体积、酸碱度（ｐＨ值）测定，采用计算机辅助精液分析仪（ＣＡＳＡ，上海伟力）分析精子浓度（×１０６ｍｌ）、前向运动精子百分率、非前向运动精子百分率、精子总活力、精子总活率、曲线运动速度、直线运动速度等指标。（２）精子形态学分析：采用深圳市博锐德生物技术有限公司生产的精液染色试剂盒（Ｄｉｆｆ－Ｑｕｉｋ快速染色法）进行精子涂片染色，镜下观察计数精子２００个左右，按照ＷＨＯ人类精液检查与处理实验室手册（第５版）标准［４］镜下评判并计算正常形态精子百分率。（３）ＣＴ－ＤＮＡ检测：ＣＴ－ＤＮＡ采用荧光定量ＰＣＲ方法进行检测，所用试剂由中山大学达安基因诊断中心生产。取１ｍｌ液化后的精液，严格按照说明书步骤提取核酸后进行ＣＴ－ＤＮＡ检测，检测仪器为ＡＢＩ７５００荧光定量ＰＣＲ仪（ＡＢＩ，美国）。因试剂盒说明书中未列出引物序列，故本文未能提供。ＰＣＲ程序如下：９３℃预变性２ｍｉｎ，９３℃４５ｓ→５５℃６０ｓ，１０个循环，９３℃３０ｓ→５５℃４５ｓ，再行荧光检测，做３０个循环。结果判断：Ｃｔ（循环阈值）＝３０为阴性，Ｃｔ＜２７为阳性，３０＞Ｃｔ≥２７为灰度区，需重复试验，若Ｃｔ＜３０则为阳性。利用试剂盒中提供的阴、阳性质控作为质量控制物。（４）ＵＵ培养：按照ＵＵ培养试剂盒（购自珠海益民生物工程制品厂）操作说明书进行操作，无菌吸取２００μｌ精液于支原体液体培养基中，３７℃恒温培养，每隔２４ｈ观察培养液颜色变化，直至接种后７２ｈ进行结果判定。阳性判断依据试剂盒说明书，使用颜色对照卡进行观察，培养液颜色由黄变红表明有ＵＵ生长，视为阳性；不变色则表明无ＵＵ生长，视为阴性。（５）细菌培养：无菌操作吸取已液化的精液１００μｌ接种至羊血琼脂平板、巧克力平板和麦康凯平板中，培养基均由广州迪景微生物科技有限公司提供，四区划线分离，置３５℃的ＣＯ２恒温培养箱培养２４～４８ｈ。观察菌落形态后涂片进行革兰染色，同时依据各菌属特征进行分离培养。细菌鉴定采用美国ＢＤＰｈｏｅｎｉｘ全自动细菌鉴定仪和法国梅里埃ＡＰＩ手工鉴定试条，严格按照说明书进行。
４．统计学分析：应用ＳＰＳＳ１７．０统计软件包对数据进行分析处理，组间比较采用秩和检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
二、结果
１．一般资料：８５２例男性不育症患者中，存在相关病原体感染的４５６例，感染率为５３．５２％。存在病原体单纯感染的４０５例，其中ＣＴ感染１４６例（感染率１７．１４％），ＵＵ感染１６５例（感染率１９．３７％），细菌感染９４例（感染率１１．０３％）；存在ＣＴ、ＵＵ或细菌中的两种或３种病原体感染的视为混合感染，混合感染５１例（感染率５．９９％）。细菌感染致病菌中以大肠杆菌居多（３８／９４，４０．４３％），金黄色葡萄球菌次之（１８／９４，１９．１５）（表１、２）。
２．病例组与对照组精液常规参数比较：各感染组男性不育症患者精液体积、精子浓度分别与对照组进行比较，无显著性差异（Ｐ均＞０．０５），而前向运动精子百分率、非前向运动精子百分率、精子总活力、正常形态精子百分率则显著低于对照组（Ｐ均＜０．０５）（表３）。
三、讨论
近年来，随着男性不育症发病率的逐渐增高，男性不育症在生殖领域引起广泛
